大鼠滑膜細(xì)胞分離自滑膜組織?;そM織是位于關(guān)節(jié)腔內(nèi)面的內(nèi)襯結(jié)構(gòu),各種關(guān)節(jié)內(nèi)疾病均會累及滑膜。而滑膜細(xì)胞是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu),同時在各種關(guān)節(jié)疾患中也是主要病變部位。
滑膜細(xì)胞是構(gòu)成滑膜層的細(xì)胞群體,是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu),它包埋在顆粒狀無定性的基質(zhì)中,基質(zhì)內(nèi)有分散的纖維分布。
目前已經(jīng)建立的大鼠滑膜細(xì)胞分離培養(yǎng)方法多以酶消化法為主,分離得到的細(xì)胞純度不高,并且培養(yǎng)時間較長。下面小編就分享滑膜細(xì)胞的提取方法。
1、大鼠經(jīng)麻醉,腹主動脈取血處死后,用酒精對膝關(guān)節(jié)進(jìn)行局部消毒,于膝關(guān)節(jié)正中縱行切開皮膚,分離肌肉,露出膝蓋骨,繼續(xù)向下分離,可見平滑光亮的滑膜組織,用手術(shù)剪分離關(guān)節(jié)囊的滑膜層和纖維層,然后取出滑膜,同法采集另一個膝關(guān)節(jié)滑膜。
2、將滑膜放入裝有PBS的EP管中,上下顛倒清洗,棄去PBS,重復(fù)兩次。
3、在EP管中用手術(shù)剪將滑膜盡量剪碎,用胰酶消化15~20min,加入2倍量的無血清培養(yǎng)基終止消化,去除培養(yǎng)基,再加入2倍量的培養(yǎng)基,將胰酶*除去。
4、把滑膜移到25mLflask中,盡量使滑膜平鋪在瓶底,避免因重疊而貼壁不牢,易被培養(yǎng)基沖起,將flask直立放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育3h。
5、取出flask,加入*培養(yǎng)基后,將flask平放于細(xì)胞培養(yǎng)箱中。
6、隔日觀察組織貼壁情況。若有輕微污染,更換培養(yǎng)基,觀察。