小鼠肝細胞通常指小鼠肝實質(zhì)細胞。在動物體正常生理和病理條件下,肝臟在能量代謝、外源物質(zhì)的生物轉(zhuǎn)化、基質(zhì)蛋白的合成、解毒等方面發(fā)揮著其重要的作用。肝實質(zhì)細胞是指具有肝功能的基本組成單位,大約占肝臟體積及數(shù)量的80%左右,肝實質(zhì)細胞具有多方面的功能,例如:蛋白質(zhì)的合成和儲存、分泌膽汁和解毒物質(zhì)等。肝實質(zhì)細胞體外常常被用作研究肝臟功能、能量代謝和肝臟疾病的良好模型
小鼠肝細胞試驗方法:
1.將小鼠斷頸致死,置75%酒精泡2-3秒鐘,取肝臟,置于盛有PBS的平皿中。
2.剔除脂肪、結(jié)締組織、血液等雜物,轉(zhuǎn)移到另一個盛有PBS液的平皿中。
2.3用手術(shù)剪將臟器剪成小塊(大小約1mm2),玻片研磨,轉(zhuǎn)到離心管,離心(1000rpm,5min)。
4.視組織或細胞量加入5-6倍(3-5ml)胰酶,37℃中消化20分鐘,每隔5分鐘振蕩一次,或用吸管吹打一次,使細胞分離。
5.加入3-5ml含血清的培養(yǎng)液以中止胰酶消化作用。
6.用100目孔徑濾網(wǎng)濾過,除去未消化的大組織塊。
7.再次離心5min,棄上清液。
8.加入無血清培養(yǎng)液5ml,沖散細胞,再離心一次,棄上清液。
9.加入含血清的培養(yǎng)液1-2ml(視細胞量),血球計數(shù)板計數(shù)。
10.將細胞調(diào)整到5×105/ml左右,轉(zhuǎn)移至6孔培養(yǎng)板中,37℃下培養(yǎng)。